Биология

Созданы ферменты, способные разрушить синегнойную палочку

© pixels.com

Группа исследователей из Института Теоретической и экспериментальной биофизики РАН и Филиала Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН с помощью методов генной инженерии сконструировала белок, способный уничтожать клетки опасной бактерии — возбудителя пневмонии.

Группа исследователей из Института Теоретической и экспериментальной биофизики РАН и Филиала Института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН с помощью методов генной инженерии сконструировала белок, способный уничтожать клетки опасной бактерии — возбудителя пневмонии. Статья об исследовании опубликована в журнале Metallomics.

Бактериофаги или их белки, избирательно уничтожающие бактериальные клетки, — одна из популярных тем в современной молекулярной биологии. Возможно, именно эти микроскопические агенты в будущем станут главной альтернативой антибиотикам, к которым, как известно, научились приспосабливаться опасные для человека бактерии.

Но как работает молекулярный механизм их направленного действия? Несмотря на более чем вековую историю изучения бактериофагов, в этом вопросе еще много неразгаданного, и любое продвижение науки в этом направлении считается большим успехом. Группа российских ученых получила на базе бактериофагов белки с новыми свойствами. По мнению авторов, это исследование поможет понять механизмы работы ферментов, способных защитить человека от серьезных патологий.

Объектом изучения в проекте был фермент литическая пептидаза бактериофага Т5. Также ученые выясняли роль ионов кальция в активации фермента на конечном этапе жизненного цикла фага — разрушении клетки хозяина и освобождении потомства. Исследователи поставили себе задачу проникнуть в структуру этого фермента и с помощью методов генной инженерии ввести в его молекулу одиночные мутации. Такие замены могут серьезно изменить физико-химические свойства молекулы белка.

«С помощью мутаций удается понять, почему природа использовала именно эту, а не другую аминокислоту в данном месте полипептидной цепи, — комментирует один из авторов статьи, заведующий лабораторией ЯМР-исследований биоструктур ИТЭБ РАН Виктор Кутышенко. — Мы не знали точно о том, какие аминокислоты участвуют в связывании кальция, а лишь предполагали это на основе исследований похожих белков, проведенных другими авторами, и на основе своих собственных работ, в том числе в получении трехмерной структуры этого фермента. Необходимую конформацию молекулы, которая делает фермент наиболее активным, позволяя ему быстро разрушать клеточную стенку бактерии, обеспечивают те самые ионы кальция Ca2+, выполняя роль стабилизатора структуры длинной подвижной петли в молекуле. С помощью мутаций мы локализовали активный центр молекулы фермента. Таким образом, мы получили белки с новыми свойствами».

Их изучение, сравнение ферментативных свойств, а также кинетических параметров связывания ионов кальция, которые, как выяснилось, изменяют конформацию молекулы, позволяет понять, что в молекуле EndoT5 является наиболее важным для проявления ферментативной активности. Все это относится к проблемам фундаментальной науки, которые с энтузиазмом решают ученые в своих лабораториях с помощью метода кругового дихроизма, позволяющего наблюдать вторичную структуру белков, а также ядерно-магнитного резонанса, способного открыть все уровни структурной организации молекулы белка.

Также в ходе этих исследований стало очевидно, что полученные мутантные белки могут быть интересны и с практической точки зрения.

«Мы экспериментально показали, что один из созданных нами мутантов, дефектный по связыванию кальция, но устойчивый к аминокислоте ЭДТА (ее добавляют специально, чтобы связать ионы металлов и посмотреть, что из этого получилось), в присутствии этого связующего вещества разрушает клетки синегнойной палочки, которая может вызывать сепсис и пневмонию», — рассказывает Виктор Кутышенко.

Понравился материал? Добавьте Indicator.Ru в «Мои источники» Яндекс.Новостей и читайте нас чаще.

Пресс-релизы о научных исследованиях, информацию о последних вышедших научных статьях и анонсы конференций, а также данные о выигранных грантах и премиях присылайте на адрес science@indicator.ru.